Главная → Новости → Научные публикации →

Проект «Динамические изменения иммунологического синапса у больных ХЛЛ, получающих разные режимы химиотерапии или таргетные препараты»

Национальное гематологическое общество совместно с ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России инициируют проведение проекта «Динамические изменения иммунологического синапса у больных ХЛЛ, получающих разные режимы химиотерапии или таргетные препараты».

Хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) является самым распространенным видом лейкемии в западных странах и в России, и составляет 12% от всех неходжкинских лимфопролиферативных заболеваний. Ежегодно заболеваемость составляет 5 случаев на 100 тысяч населения и увеличивается с возрастом. Современная терапия во многих случаях позволяет добиться длительных и стойких ремиссий, но на сегодняшний день ХЛЛ остается неизлечимым заболеванием. Средний возраст на момент установления диагноза составляет около 65 лет и только 30% больных моложе 65 лет.

ХЛЛ является гетерогенным по клиническому течению заболеванием, со временем прогноз у одного и того же больного может существенно меняться в зависимости от появления тех или иных факторов риска. При этом, течение опухоли может варьировать от индолентного до агрессивного.

В немногочисленных исследованиях последних нескольких лет было продемонстрировано, что новые таргетные препараты, применяемые в лечении ХЛЛ, помимо своего целенаправленного воздействия на конкретные звенья патогенеза, способны влиять на иммунную систему больных ХЛЛ, и в отличие от стандартных режимов химиотерапии, не оказывают такого неблагоприятного воздействия на Т-клетки.

Представляет большой интерес изучение и сравнение динамики изменений в Т-клеточном звене иммунитета у пациентов хроническим лимфолейкозом на фоне различных режимов терапии. Восстановление иммунного ответа, как в случае аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток, оказывает лечебный эффект, который в первую очередь опосредован Т-клетками. Все это говорит о том, что восстановление функции Т-клеток при ХЛЛ, наблюдаемое, в том числе, в ходе терапии новыми таргетными препаратами, может контролировать и потенциально вылечить это заболевание. Понимание природы дефекта Т-клеточного иммунитета, а именно иммунологического синапса,может помочь в разработке новых терапевтических подходови предсказать эффективность терапии.

В рамках проекта исследование иммунологического синапса будет осуществляться методом проточной цитофлуориметрии, позволяющим с помощью моноклональных антител, меченных флуорохромами, детектировать экспрессию разнообразных антигенов. На поверхности T-лимфоцитов будет изучена экспрессия молекул CD3, CD4, CD8, позволяющих дифференцировать T-клетки от остальных лейкоцитов и разделить на две основные субпопуляций – T-хэлперы (CD3⁺CD4⁺) и T-цитотоксические клетки (CD3⁺CD8⁺); молекул CD197 (CCR7), CD45RA, CD27,CD28 и CD95, экспрессия которых варьирует в зависимости от стадии дифференцировки T-клеток и на основании экспрессии этих 5-ти молекул T-лимфоциты можно достоверно разделить по крайней мере на 6 различных субпопуляций, среди которых наивные клетки, стволовые клетки центральной памяти, клетки центральной памяти, транзиторные клетки памяти, эффекторные клетки памяти и терминальные эффекторные клетки; на каждой из этих субпопуляцийT-лимфоцитов будет определена экспрессия антигенов CXCR3, CXCR5, CCR4, CCR6 и CCR10 – хемокиновых рецепторов, которые определяют функциональные возможности этих клеток, а в случае T-хэлперов позволяют выделить различные их подтипы – T-хэлперы 1-ого, 2-ого, 9-ого, 17-ого и 22-ого типов, а также выявить популяцию фолликулярных T-хэлперов; также среди минорных субпопуляций T-лимфоцитов будет определена экспрессия молекул PD-1 и TIGIT, которые указывающих на “истощенное” состояние T-клеток.

Используемый набор антител также позволит оценить функциональные возможности и степень зрелости NK-клеток (CD3^-CD56⁺лимфоциты), на основании экспрессии на них молекул CD160, TIGITи PD-1, указывающих на активацию NK-клеток и молекул CD27, CD45RAи CCR7, отражающих стадии созревания NK-клеток и их хоминговый потенциал.

На поверхности B-клеток будет изучена экспрессия следующих молекул: CD19 и CD5, что позволяет дифференцировать B-лимфоциты от остальных лейкоцитов, а также достоверно выделить лишь опухолевые B-клетки (CD19⁺CD5⁺); молекулHLA-DR, CD80, CD86, участвующих в формировании иммунологического синапса и связывающихся с Т-клеточным рецептором и CD28, соответственно; молекулы PD-L1, отвечающей за негативную регуляцию T-клеточного ответа (является лигандом молекулы PD-1); молекул PD-1 и CD40, указывающих на активированный статус B-клетки; молекул CD73 и CD21, отражающих функциональный статус B-лимфоцитов.

Результаты исследования могут помочь выявить параметры или сочетания параметров, имеющие прогностическую значимость на различных этапах проводимой при ХЛЛ терапии.

Исследование будет выполнено с использованием проточного цитофлуориметра CytoFLEX, позволяющего детектировать сигнал одновременно от 13-ти различных флуорохромных красителей. Для исследования T-, B- и NK-клеток будут использованы следующие сочетания флуорохром-антитело: